猴頭菇體外抑制幽門螺桿菌的研究（2010）
研究機構(gòu)：中國科學(xué)院上海生命科學(xué)研究院
摘要：全球約2/3的人口感染幽門螺桿菌（Helicobacter pylori），其中約10％會致病?，F(xiàn)已確認幽門螺桿菌是慢性活動性胃炎的病原菌，是消化性潰瘍的重要致病因子。長期大量的臨床實踐表明，中藥猴頭菌片單獨或輔助其它化學(xué)藥物，對治療慢性胃炎、消化不良，預(yù)防及治療胃、十二指腸潰瘍復(fù)發(fā)等疾病有確切的良好療效。在猴頭菇(Hericium erinaceum)----慢性胃炎和消化性潰瘍----H.pylori三者中，已經(jīng)基本建立了其中的兩對關(guān)系，但對猴頭菇----H.pylori之間的關(guān)系尚不清楚。那么，猴頭菇有沒有抑制H.pylori的作用？相關(guān)活性的物質(zhì)基礎(chǔ)是什么？本文就這兩個問題進行了研究。結(jié)果表明：猴頭菇菌絲、發(fā)酵液及子實體均具有抑制幽門螺桿菌體外生長的作用；猴頭菇中起抑菌作用的成分是醇溶性小分子而非多糖等大分子；從猴頭菇子實體中新發(fā)現(xiàn)兩種猴頭菇酮類化合物:猴頭菇酮K(hericenone K)和猴頭菇酮L(hericenone L)；猴頭菇子實體中產(chǎn)生的可以抑制幽門螺桿菌體外生長的化合物包括：已知化合物麥角甾醇、猴頭菇堿(hericerin)及新發(fā)現(xiàn)的猴頭菇酮K和L(hericenone K和hericenone L)。主要研究內(nèi)容包括：
（1）比較了22株不同來源供試猴頭菌菌株的菌絲生長、子實體產(chǎn)生等生物學(xué)性狀及其ITS序列。結(jié)果顯示，供試猴頭菇菌株的菌絲在馬鈴薯葡萄糖培養(yǎng)基(PDA)上的生長狀態(tài)主要可分為快生型和慢生型兩種類型。猴頭菇菌株0605在葡萄糖酵母提取物培養(yǎng)基搖瓶發(fā)酵過程中，前12d培養(yǎng)液的pH值由初始的6.0逐漸下降到4.4左右，此后酸度波動幅度加劇;殘?zhí)莿t在約第15d左右降至基本為0，與此同時，菌絲生物量從第4d開始增加，至14d達到一個峰值后有所下降，在第約17d-19d時又攀高。參試絕大多數(shù)猴頭菇菌株在以棉籽殼、麩皮為主要原料的培養(yǎng)料中生長較快，且菌絲致密粗壯。多數(shù)菌株子實體發(fā)育良好，其中又以0629等2個菌株菌絲長速快、現(xiàn)蕾早、菇形大，形態(tài)好，可以做為子實體生產(chǎn)的優(yōu)良品種。序列分析表明，供試22株猴頭菇菌株ITS/5.8S rDNA區(qū)域的堿基序列與GeneBank中已經(jīng)登錄的猴頭菇H.erinaceum菌株相應(yīng)序列相似程度最高（可達99％），與猴頭菇屬其它種差別較大。首次發(fā)現(xiàn)供試猴頭菌各菌株ITS區(qū)域的3個單核苷酸多態(tài)性（single nucleotide polymorphisms，SNP）位點:位于ITS1區(qū)的第48位堿基、ITS2區(qū)第444位堿基各有一個T/C位點，ITS2區(qū)第521位一個C插入/缺失位點。綜合分析猴頭菇菌株在菌絲生長、子實體形態(tài)等生物學(xué)性狀及其ITS序列，表明這些菌株為猴頭菇菌株無誤，為開展進一步的研究奠定較好基礎(chǔ)。
（2）應(yīng)用培養(yǎng)基微量稀釋法、打孔法和菌絲牒法等抑菌方法，檢測了猴頭菇（Hericium erinaceum）菌絲和發(fā)酵液、猴頭菇子實體和發(fā)酵液的醇提取物、中藥猴頭菌片醇提取物和猴頭菌粗多糖及靈芝(Ganoderma lucidium)、金針菇（Flammulina velutiper）、蛹蟲草（Cordyceps militaris）、杏鮑菇（Pleurotus eryngii）、茶樹菇(Agrocybe aegerita)、香菇（Lentinula edodes）、巴西蘑菇(Agaricus blazei)、平菇（Pleurotus ostreatus）、毛頭鬼傘（Coprinus comatus）、雙孢蘑菇(Agaricusbisporus)、灰樹花（Grifola frondosa）、桑黃（Phellinus igniarius）、蟹味菇（Hypsizygus marmoreus）等另外13種食藥用菌子實體乙醇提取物對H.pyloriATCC43504、H.pylori SS1、金黃葡萄球菌Staphylococcus aureus CMCC26003、大腸桿菌Escherichia coli CMCC44103和E.coli ATCC25922體外生長的抑制情況。結(jié)果表明:1）供試食藥用菌子實體乙醇提取物樣品對三種細菌的抑菌表現(xiàn)不同:在約10mg/mL的濃度下，所有樣品對兩株E.coli CMCC44103和ATCC25922均無抑菌活性;僅猴頭菇和靈芝提取物對S.aureus CMCC26003有抑菌活性;除雙孢蘑菇和金針菇外的其它12種食藥用菌乙醇粗提物對H.pylori ATCC43504和H.pylori SS1的最低抑菌濃度(Minimum Inhibitory Concentration，MIC)在1 mg/mL-5mg/mL之間。檢測猴頭菇各提取物樣品對H.pylori和S.aureus的MIC，結(jié)果顯示:經(jīng)過進一步提取的猴頭菇子實體精提取物對H.pytoriATCC43504、H.pytori SS1和S.aureus CMCC26003的MIC分別為＜1 mg/mL、＜1mg/mL和4-8mg/mL，發(fā)酵液精提物對三株菌的MIC分別為＜1mg/mL、＜1.4mg/mL和1-2mg/mL，其中一種猴頭菌片醇提物對三株菌的MIC分別為2.5-5mg/mL、2.5-5mg/mL和5-10mg/mL;這些提取物對H.pylori的抑菌活性均比對S.aureus強。另一種猴頭菌片醇提物和猴頭菇粗多糖分別在10mg/mL和22.5mg/mL濃度下未檢測到抑菌活性。猴頭菇子實體精提物樣品對H.pyloriATCC43504的IC50為73.0μg/mL，最低殺菌濃度為200μg/mL。22株猴頭菌菌株發(fā)酵液正丁醇提取物表現(xiàn)出不同的抑制H.pylori ATCC43504活性。生長時間不同的猴頭菇0605菌株P(guān)DA菌絲對H.pylori ATCC43504的抑制效果不同，過老或過嫩均未顯示出抑菌，“中年”的菌絲表現(xiàn)出較強的抑菌效果;發(fā)酵液從第6天開始出現(xiàn)抑菌活性，第10天達到最佳，此后又有所下降，表明猴頭菌抑菌成分的產(chǎn)生和分泌與菌株及其菌絲的生長狀態(tài)密切相關(guān)。本部分結(jié)果表明猴頭菇和靈芝不同于其它常見食藥用菌，可產(chǎn)生對H.pylori和S.aureus都有抑菌作用的成分。
（3）以抑菌活性跟蹤結(jié)合醇提、有機溶劑萃取、硅膠層析、波譜分析等技術(shù)研究了猴頭菌抑制H.pylori的物質(zhì)基礎(chǔ)。從猴頭菇子實體中新發(fā)現(xiàn)兩種猴頭菇酮類化合物:分別命名為猴頭菇酮K(hericenone K)和猴頭菇酮L(hericenone L)，另分離鑒定出已知化合物麥角甾醇(ergosterol)、猴頭菇堿(hericerin)、猴頭菇酮A(hericenone A)。新發(fā)現(xiàn)猴頭菌中麥角甾醇、猴頭菇堿和兩種新的猴頭菇酮混合物對幽門螺桿菌體外生長有抑制作用，其對H.pylori ATCC43504的MIC分別為2.5-5mg/mL、0.25-0.5mg/mL和＜0.3mg/mL。另外，麥角甾醇、猴頭菇堿和兩種新的猴頭菇酮混合物還具有抑制腫瘤細胞L1210增殖的活性。
來源：https://d.wanfangdata.com.cn/thesis/ChJUaGVzaXNOZXdTMjAyMDEwMjgSCFkyNDMxMTAxGgh4ZmdyajZodA%3D%3D
相關(guān)研究
幽門螺桿菌(Helicobacter pylori)已被認為與胃炎、胃潰瘍、十二指腸潰瘍等疾病的產(chǎn)生有關(guān)，因此根除幽門螺桿菌感染已成為這些疾病療程的一環(huán)。
TGF-β1/Smad信號通路與肝纖維化有關(guān)。以往的研究表明黃多糖可以防止肝纖維化的發(fā)展，但尚不清楚多糖是否會影響TGF-β1/Smad信號通路。
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